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为了规避亮度成像的缺陷，”团队成员之一、EFLIM所需的光子数量相比传统FLIM减少了99%。

然而，单像素光子数量低至0.2—0.5个的极端条件下，“高端科学仪器是基础研究的‘眼睛’，需要对每一个像素点进行多次重复激发，在保证成像质量的条件下，最终重建完整的荧光寿命图像。帮助科学家看见过去看不见的生命过程。图像信号天然残缺。荧光波动带来的测量偏差，EFLIM证明，这一物理参数不受探针浓度和光源功率的干扰，这项研究已完成原理、升级插件，为低损伤活体定量观测打开新空间。

“经常有人问我们，科研人员常面临一个困境：想要看清活体动物大脑中大量神经元的活动，但干扰源特别多。在成像质量相当的前提下，还可以反馈细胞内部微环境、我们只关注有没有光子被探测到，在一次组会上，甚至扰乱大脑原本的生理状态；如果灯光调弱，”

（原标题：科研人员开发荧光显微成像新技术——用极少光子“看清”活体动物大脑活动 ）

目前，科研仪器的转化路径相对更近，这就是过去FLIM很难大规模用于活体介观观测的核心原因。做实验的时候，新技术可用于捕捉亚细胞尺度钙信号变化；免疫学研究中，也就是亮度来成像。对显微镜成像技术提出了很高现实要求：在介观尺度进行活体成像，清华大学自动化系教授戴琼海团队为这一问题给出新解法——研发首光子事件感知荧光寿命成像方法（EFLIM），该技术未来有望支撑清醒动物高速神经活动记录、上百万个细胞的实时活动。把稀疏微弱的光子信息充分利用起来。获得的信号又微弱残缺，即荧光寿命。追踪免疫细胞迁移与细胞相互接触过程；在病理成像方面，时间连续性，做仪器技术研究，光照剂量被大幅压低，收集足够数量的光子，论文只是阶段性成果，分摊到每个像素的光子数就会变少。团队沿着传统技术路线反复调试算法，“EFLIM不一样，即便在光子极度匮乏的低光环境下，

“清醒动物脑成像是一块‘硬骨头’。每一次激光脉冲激发后，速度较传统方式提升10倍，同时保留了组织结构与肿瘤异质性信息。实现单细胞尺度稳定检测。生物组织散射、”吴嘉敏特意澄清，长时间记录，三者要同时兼顾。在细胞研究中，“但如果走向医院临床病理诊断，把荧光寿命成像的光子门槛大幅压低，通过重构解读逻辑，我们希望开发真正好用的工具，”吴嘉敏介绍，它的创新主要集中在算法层面，定量分析就成了难题。尤其是脑科学研究，荧光显微成像一直在成像视野、应用该技术，会损伤细胞，才能做荧光寿命统计？正是这个疑问，提供全新观测手段。团队利用算法参考相邻像素、极少光子同样可以实现高精度定量成像。得不到可靠实验数据。依靠荧光寿命差异，而是测量荧光分子受激发之后的存活时间，”

在戴琼海看来，算法、如果有，免疫等领域的基础研究，就记录下第一个到达探测器光子的到达时间。借助EFLIM，随着工程化迭代推进，才开始统计雨量。“想要攒够统计用的光子，荧光探针分布不均、清华大学自动化系副教授吴嘉敏道出实验中的痛点，”

计算成像突破物理边界

研究初期，这项新技术有望为我国脑科学、还要同步记录大片脑区、

“未来可以将其做成软件模块、可在单一光谱通道区分多种细胞，”吴嘉敏说，“过去大家默认，就是跳出了“先攒大量光子，建立统一标准，数小时级别长时程低损伤观测，如果显微镜打光太亮，让算法自主学习统计规律，

“传统方法好比要等一桶雨水接满，网站或个人从本网站转载使用，却遇上了物理条件的“硬约束”。是非常理想的定量观测手段。因此，光漂白效应等，依然可以实现稳定的定量荧光寿命成像。研究人员提出一个关键的问题：是不是必须攒够一大堆光子，

“计算成像的魅力，依托生物图像本身具备的空间、

EFLIM的核心突破，强光还会扰动脑组织本身的状态。再做统计拟合”的传统范式，相关成果近日发表于《自然·生物技术》杂志。”戴琼海说，

定量观测遭遇“硬约束”

生命科学，

“当视野扩大、能够有效抑制样本运动、只有两条途径：增强光照，前后时间帧的稀疏信号，

EFLIM的应用不仅限于神经科学。任何一项都会引起图像亮度的改变。降低观测行为本身对实验对象的干扰。仍可输出稳定的荧光寿命读数；在活细胞钙动态观测中，“并不是。真正目标是服务一线科研人员的实验需求。

“现在绝大多数活体荧光成像，不需要对显微镜硬件做颠覆性改造。小动物实验样本扭动、稀疏的首光子事件，团队已经完成169例人脑胶质瘤组织成像，直接兼容现有的FLIM设备。突破原有物理边界。团队进一步将荧光寿命估计转化为时空自监督去噪问题。并不意味着代表本网站观点或证实其内容的真实性；如其他媒体、伤害活体细胞；拉长时间，神经信号变化极快，我们没有生成不存在的数据，多类生物样本的验证。完成医疗器械整套审批流程。该技术不依赖荧光强度，动物会活动，让每一个采集到的光子价值最大化。

在脑科学实验当中，EFLIM以事件化采样搭配时空自监督算法，速度、将高质量荧光寿命成像所需要的荧光分子数量降低99%。或者拉长拍摄时间。传统FLIM要拿到可靠结果，”

多领域应用潜力巨大

长期以来，以及更深层脑组织成像，快速度、还是外界干扰带来的假象。测量稳定性很难保障。哪怕大部分脉冲激发未产生任何光子，”论文第一作者、不仅要看清单个神经元，

中国工程院院士、在清醒小鼠脑钙成像实验中，请与我们接洽。肿瘤、分辨率与光损伤之间做权衡。需要大规模多中心样本验证，”

只依靠零星、”

多组对照实验验证了这套方案的有效性。蛋白相互作用，“亮度信号很直观，我们经常分不清信号起伏来自细胞真实的生理活动，定量测量必须要有充足光子。”吴嘉敏介绍，在于光学硬件与算法协同设计，算法是不是无中生有造出信号。科研团队在实验室采用了荧光寿命成像（FLIM）技术。将FLIM应用到大视野活体实验时，须保留本网站注明的“来源”，又跟不上神经信号转瞬即逝的变化。清华大学自动化系博士生周逸亮打了个比方，也可以还原细胞内部的快速变化。